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： 基因AGL6启动子和NAC67过表达研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 基因AGL6启动子和NAC67过表达研究/.孙博著/.和凤美指导 |
| 出版发行项： | 2022.04.21 |
| 载体形态项： | 59页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 园林园艺学院,学号2019210172 |
| 提要文摘： | 兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中的第一大科，栽培历史悠远绵长，我国兰科植物地理分布广阔，花型多样性丰富，具有极高观赏价值，但有关兰花奇花形成的分子机理的报导却未见阐述，因此探索兰花花型多样性的遗传机理和参与花器官发育相关基因的调控表达模式，对保护兰科植物资源，培育优良品种具有重要意义。 AGL6基因是MADS-box基因家族中的一员，前人研究发现AGL6基因参与多种植物花器官的形成，尤其对唇瓣的形成起到关键作用。但有关其启动子的研究报导却很少，对于兰科植物AGL6基因启动子分段表达的研究更是寥寥无几，为了探究该基因启动子区域的表达调控模式，本研究构建了兰科石斛属（Dendrobium）的铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）AGL6基因启动子不同长度5’端缺失片段，瞬时转化拟南芥和铁皮石斛原球茎进行GUS组织活性检测，根据不同长度启动子片段活性分析AGL6基因启动子在兰科植物中的适用性，为该基因在花器官形成中的功能研究奠定基础。 NAC67基因是最新挖掘到的参与花器官形成发育的基因，有研究表明该基因与MADS家族基因互作，协同调控兰科植物花器官发育，对唇瓣的发育起到正调控作用。但该基因影响兰科植物花型形成的研究并不多，在花器官形成发育过程中的功能仍不清楚，为了探究NAC67基因的功能，本研究对兰科蝴蝶兰属（Phalaenopsis）的小兰屿蝴蝶兰（Phalaenopsis equestris）NAC67基因构建了过表达载体，并通过农杆菌介导遗传转化铁皮石斛，期望通过观察开花表型变化探索小兰屿蝴蝶兰NAC67基因在花器官形成中的功能。研究结果如下： 1.成功克隆了铁皮石斛AGL6基因，编码区长729bp，编码243个氨基酸，蛋白分子式为C1213H1955N359O375S12，分子量为27952.77Da，理论等电点pI为8.97，属于亲水性蛋白，亚细胞定位预测在细胞核中；保守结构域分析表明，AGL6基因具有MADS基因家族典型的MADS-box结构域和K-box结构域，属于TypeⅡ型基因，系统进化分析和蛋白同源比对分析结果表明铁皮石斛AGL6基因在进化过程中与文心兰EpAGL6亲缘关系最近。 2.成功扩增铁皮石斛AGL6基因上游1891bp启动子序列，与课题组数据库中铁皮石斛AGL6基因上游2000bp序列比对同源性达94.4%，对启动子区域进行生物信息学分析结果表明，除含有核心启动元件TATA-box、CAAT-box外，还包含其他多个顺式作用元件，如MADS-box蛋白结合位点，NAC结合位点NACBS，光调控相关元件、生长发育相关元件、脱落酸响应元件、茉莉酸甲酯响应元件、水杨酸响应元件等。 3.构建了3个铁皮石斛AGL6基因启动子5’缺失片段表达载体：pCAMBIA1300-A1、pCAMBIA1300-A2、pCAMBIA1300-A3，测序无误表明表达载体构建成功。将构建成功的3个启动子片段表达载体通过农杆菌菌液浸泡法瞬时转化拟南芥及铁皮石斛原球茎，GUS染色结果显示在拟南芥中AGL6基因启动子5’缺失片段均能启动GUS报告基因的表达，具有启动活性，且随着5’缺失片段的增长活性逐渐降低；在铁皮石斛原球茎中，GUS染色结果与拟南芥相同，再次证明AGL6基因启动子5’缺失片段均具有启动活性，活性随着5’缺失片段的增长呈下降趋势。同时观察拟南芥器官染色情况，初步判断该启动子在拟南芥的根、叶、果实、花中表达，且在根和花中活性较高。铁皮石斛AGL6基因启动子5’缺失片段活性与35s启动子相比均较弱，因此该基因启动子不适合作为兰科植物启动子使用。 4.成功构建小兰屿蝴蝶兰NAC67基因的过表达载体：PU1300-N67，经酶切、PCR验证，确定过表达载体构建成功。使用农杆菌介导法将小兰屿蝴蝶兰NAC67基因过表达载体转化铁皮石斛，已获得阳性转化苗。 |
| 并列题名： | Study on the AGL6 Gene Promoter and Overexpression of NAC67 Gene eng |
| 题名主题： | 铁皮石斛 小兰屿蝴蝶兰 AGL6基因 NAC67基因 启动子活性 过表达 学位论文 |
| 中图分类： | S567.239-533 |
| 个人名称等同： | 孙博 著 |
| 个人名称次要： | 和凤美 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20230315 |