书目详细信息
： 瑞士乳杆菌R0052抑制人IECs NF-κB炎症信号通路活化作用及机制
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 瑞士乳杆菌R0052抑制人IECs NF-κB炎症信号通路活化作用及机制/.叶朋飞著/.林秋叶指导 |
| 出版发行项： | 2019.6.4 |
| 载体形态项： | 89页:;+图表:;+30cm |
| 提要文摘： | 免疫调节作为益生菌的主要益生功能，已经成为国内外食品科学领域的研究热点。大量研究证实，益生菌通过抑制肠上皮细胞（intestinal epithelial cells，IECs）NF-κB细胞信号通路活化发挥免疫调节作用。前人和课题组研究发现，益生菌瑞士乳杆菌R0052能够在IECs水平抑制促炎细胞因子表达，然而其对NF-κB信号通路活化的作用及机制尚未阐明清楚。本论文以HT-29人IECs为研究对象，以肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）诱导的HT-29人IECs为炎症模型，研究瑞士乳杆菌R0052对NF-κB信号通路活化的影响，进一步以NF-κB信号通路活化调控分子活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）为靶点，深入阐明瑞士乳杆菌R0052对人IECs NF-κB信号通路活化的抑制作用及机制。本论文主要研究结果如下： （1）研究了瑞士乳杆菌R0052对TNF-α诱导的HT-29人IECs NF-κB信号通路关键基因表达的影响：分别将105、106和107 CFU 瑞士乳杆菌R0052与HT-29人IECs孵育16小时，添加促炎剂TNF-α诱导，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测NF-κB信号通路关键基因的mRNA表达水平，结果显示，与TNF-α诱导组相比，105 CFU的瑞士乳杆菌R0052预孵育对NF-κB信号通路关键基因表达均无显著影响；106、107 CFU的瑞士乳杆菌R0052预孵育组均显著抑制了NF-κB主要成员核因子-κB2（NFKB2）的基因表达，均显著增加了NF-κB信号通路负性调控分子B细胞抑制因子α中κ轻链多肽基因增强子的核因子（NFKBIA）和肿瘤坏死因子a诱导蛋白3（TNFAIP3）的基因表达，106、107 CFU的瑞士乳杆菌R0052间NFKB2、NFKBIA和TNFAIP3基因表达无显著差异；将106 CFU的瑞士乳杆菌R0052分别与HT-29人IECs孵育4、8、12、16、20、24小时，添加TNF-α诱导，结果显示，与TNF-α诱导组相比，瑞士乳杆菌R0052预孵育对NF-κB信号通路关键基因NFKB1、RELB和IKBKE表达均无显著影响，瑞士乳杆菌R0052预孵育16、20和24小时显著抑制了NFKB2基因表达，而显著增加了NFKBIA和TNFAIP3基因表达，其中瑞士乳杆菌R0052预孵育16小时作用最强。上述结果表明，瑞士乳杆菌R0052 在mRNA表达水平抑制了TNF-α诱导人IECs NF-κB信号通路活化，抑制作用具有时间和剂量依赖性，106 CFU瑞士乳杆菌R0052预孵育16小时对NF-κB信号通路关键基因表达的调控作用最强。 （2）研究了瑞士乳杆菌R0052对TNF-α诱导的HT-29人IECs NF-κB信号通路活化的抑制作用：将106 CFU的瑞士乳杆菌R0052与HT-29人IEC孵育16小时再添TNF-α作为瑞士乳杆菌R0052处理组，TNF-α诱导HT-29人IECs作为炎症组，HT-29人IECs作为对照，采用Western blotting分别检测抑制蛋白IκB-α降解、p65磷酸化和关键上游激酶IKKα/β的活化水平，应用转录因子DNA结合ELISA法检测p65与DNA结合活性，采用实时荧光定量PCR检测NF-κB信号通路调控下游靶基因白介素-8（interleukin-8，IL-8）和趋化因子配体（ C-C motif chemokine ligand 20，CCL20）的mRNA表达水平，ELISA检测细胞培养上清液IL-8和CCL-20的分泌水平，结果显示，TNF-α诱导了HT-29人IECs抑制蛋白IκB-α降解、p65磷酸化和p65与DNA结合活性，与TNF-α诱导组相比较，瑞士乳杆菌R0052预孵育显著抑制了抑制蛋白IκB-α降解、p65磷酸化和p65与DNA结合活性；TNF-α诱导HT-29人IECs 中磷酸化的NF-κB信号通路关键上游激酶IKKα/β显著增加，而瑞士乳杆菌R0052预孵育对磷酸化IKKα/β表达量无显著影响；TNF-α诱导的HT-29人IECs 促炎细胞因子IL-8和CCL-20的mRNA表达和分泌水平均显著增加，与TNF-α诱导组相比较，瑞士乳杆菌R0052预孵育组HT-29人IECs 中IL-8和CCL-20的mRNA表达和分泌水平均显著降低。上述研究结果表明，瑞士乳杆菌R0052抑制了TNF-α诱导HT-29人IECs NF-κB信号通路的活化。 （3）研究了瑞士乳杆菌R0052通过ROS对TNF-α诱导的HT-29人IECs NF-κB信号通路活化的抑制作用机制：瑞士乳杆菌R0052与HT-29人IECs预孵育再添加TNF-α为瑞士乳杆菌R0052处理组，瑞士乳杆菌R0052和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）与HT-29人IECs共同预孵育再添加TNF-α为瑞士乳杆菌/抗氧化剂处理组，TNF-α诱导HT-29人IECs作为炎症组，HT-29人IECs作为对照，采用荧光ELISA和荧光倒置显微镜检测ROS产生，采用实时荧光定量PCR检测NF-κB信号通路关键基因表达，Western blotting检测NF-κB p65抑制蛋白IκB-α降解、p65磷酸化和p65亚基核转位，采用转录因子DNA结合ELISA法检测p65与DNA结合活性，采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测ROS下游抗炎分子热休克蛋白72（heat shock protein 72，Hsp72）的mRNA和蛋白表达水平，结果显示，瑞士乳杆菌R0052预孵育的HT-29人IECs胞内产生大量ROS，抗氧化剂NAC处理显著降低了胞内ROS含量；与瑞士乳杆菌R0052处理组相比较，瑞士乳杆菌/抗氧化剂处理组HT-29 人IECs NFKB2基因mRNA表达水平显著增加，NFKBIA和TNFAIP3 mRNA表达水平显著降低；抗氧化剂NAC处理后瑞士乳杆菌R0052对NF-κB p65亚基核转位、DNA结合活性以及抑制蛋白IκB-α降解抑制作用显著降低，而对p65磷酸化无显著影响；与TNF-α诱导组比较，瑞士乳杆菌R0052显著促进了Hsp72的mRNA和蛋白表达水平，而抗氧化剂NAC处理后Hsp72的mRNA和蛋白表达水平显著降低。上述研究结果表明，瑞士乳杆菌R0052通过ROS抑制了TNF-α诱导HT-29人IECs NF-κB信号通路的活化。 综上所述，本研究证实了瑞士乳杆菌R0052对人IECs NF-κB信号通路活化具有抑制作用，并阐明了其抑制作用机制，为深入揭示瑞士乳杆菌R0052免疫调节作用机制奠定了基础。 |
| 并列题名： | Inhibitory Effect of Lactobacillus helveticus R0052 on Activation of NF-κB Inflammatory Signaling Pathway in Human IECs and its Mechnisms of Action |
| 题名主题： | 益生菌 瑞士乳杆菌 NF-κB 信号通路 IκB-α p65 ROS 学位论文 |
| 中图分类： | TS201.3-533 |
| 个人名称等同： | 叶朋飞 著 |
| 个人名称次要： | 林秋叶 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20200312 |