针对多油辣木（Moringa oleifera）PKM-1品种内高度杂合、种性容易退化，拟通过花药培养获得双单倍体植株，实现品种内纯合。本研究以多油辣木PKM-1花药为材料，通过花药低温预处理、培养基优化、不同培养温度试验，建立多油辣木PKM-1花药愈伤组织诱导体系。进一步，在花药愈伤组织分化植株阶段，添加PVP、AC（活性炭）、Vc和AgNO₃等褐化抑制剂，并测定相应愈伤组织总酚含量及PPO、POD和SOD等褐化相关酶的活性，筛选愈伤分化阶段的褐化抑制剂，为多油辣木PKM-1双单倍体育种提供理论依据。主要研究结果如下：
1.多油辣木PKM-1花药愈伤组织诱导。PKM-1小孢子发育经历单核期、双核期和三核期，之后发育为成熟的花粉细胞；小孢子内部结构变化与花蕾外部形态相关联；一般情况下，花蕾长（0.90±0.05）cm，宽（0.42±0.01）cm，小孢子多处于单核期，有利于花药培养获得愈伤组织。4℃低温预处理3天，基本培养基1/2MS，蔗糖30g/L，附加1.0mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA，愈伤组织诱导率最高（33.70%）。
2.多油辣木PKM-1花药愈伤组织分化。以MS为基本培养基，添加蔗糖30g/L，愈伤组织颜色青绿、较紧实，优于以B5为基本培养基，添加蔗糖30g/L。添加2.0mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA，愈伤组织有明显的颗粒状突起，生长状态较好；添加KT，愈伤组织疏松易褐化；添加2,4-D，愈伤组织表面有白色绒毛状物质。28℃培养，愈伤组织较紧实，褐化慢；33℃时疏松，易褐化。分化过程中愈伤组织持续增殖，未分化出不定芽，但获得了少量不定根。
3.多油辣木PKM-1花药愈伤组织分化时褐化抑制剂筛选。AC处理下，0.5g/L的褐化率最低为3.57%，总酚含量为861.82mg/g FW，SOD活性为91.59U/g FW；PVP处理下，2.0g/L的褐化率最低为30.00%，总酚含量为898.18mg/g FW，SOD活性为87.93U/g FW；Vc处理下，100mg/L的褐化率最低为37.78%，总酚含量为1095.15mg/g FW，SOD活性为70.09U/g FW；AgNO₃处理下，50mg/L的褐化率最低为42.22%，总酚含量为1025.45mg/g FW，SOD活性为79.68U/g FW。综上，抑制褐化最好的为AC，浓度为0.5g/L。
 
关键词：多油辣木；花药；愈伤组织；分化；褐化