书目详细信息
： 灯盏花黄酮6-羟化酶基因的克隆与表达载体构建
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00(估)缴送 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 灯盏花黄酮6-羟化酶基因的克隆与表达载体构建/.喻孟冬著/.张广辉指导 |
| 出版发行项： | 2016.5 |
| 载体形态项： | 57页:;+图表 :;+30cm |
| 提要文摘： | 灯盏花Erigeron breviscapus ( Vant. ) Hand. -Mazz.是菊科飞蓬属多年生草本植物，主要分布于我国西南地区，尤以云南较多。具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛的功效。灯盏乙素为其主要药用成分，具有扩张血管、增加血流、改善微循环、降低血黏度和预防血小板凝聚等功能。目前，对灯盏花的研究主要集中在化学成分的提取分离、药理活性及组织培养等方面，关于灯盏乙素生物合成途径相关酶基因的研究进行的较少。本论文通过转录组测序和RT-PCR获得灯盏花F6H1、F6H2基因，应用生物信息学软件对两个序列进行理化性质和结构功能分析，利用荧光定量PCR检测组织表达模式，HPLC分析各组织灯盏乙素的含量，同时构建植物表达载体。为进一步研究EbF6H1和EbF6H2在灯盏花中的功能奠定了基础。研究结果如下： 1. 从灯盏花中克隆了EbF6H1和EbF6H2基因，大小分别为1608bp和1693bp，与罗勒CYP82D33和薄荷CYP82D62的一致性分别为54%和52%。 2. 本文从灯盏花中分离的EbF6H1基因，开放阅读框为1476bp，预测编码492个氨基酸的蛋白质。对 EbF6H1蛋白进行生物信息学分析表明，EbF6H1蛋白的等电点为6.06，分子质量为56.05 kDa，分子式为C2538H3966N664O723S22，属于稳定的疏水性蛋白；二级结构预测结果显示，EbF6H1蛋白为混合型蛋白；蛋白功能区分析显示，EbF6H1蛋白含有细胞色素P450功能区域；亚细胞定位分析表明，EbF6H1蛋白定位于内质网膜的可能性最大；没有发现信号肽，属于非分泌性蛋白；PROSITE SCAN分析表明，EbF6H1蛋白含有数目不等的功能基元，包括N糖基化位点、cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、酪蛋白激酶II磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-豆蔻酰化位点等。 3. 本文从灯盏花中分离的EbF6H2基因，开放阅读框为1524bp，预测编码507个氨基酸的蛋白质。对EbF6H2蛋白进行生物信息学分析表明，EbF6H2蛋白的等电点6.16，分子质量57.33 kDa，分子式为C2595H4069N687O733S22，属于稳定的疏水性蛋白；二级结构预测结果显示，EbF6H2蛋白为混合型蛋白；蛋白功能区分析显示，EbF6H2蛋白含有细胞色素P450功能区域；亚细胞定位分析表明，EbF6H2蛋白定位于内质网膜的可能性最大；没有发现信号肽，属于非分泌性蛋白；PROSITE SCAN分析表明，EbF6H2蛋白含有数目不等的功能基元，包括N糖基化位点、cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、酪蛋白激酶II磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-豆蔻酰化位点等。 4. 荧光定量PCR检测表明EbF6H1主要在根中表达，其他组织中的表达量都很低；EbF6H2在叶片中表达量最高，是根中的5.36倍，茎中的7.5倍，花中的22.3倍；而EbF6H3为组成型表达，在各种组织中的表达量均不高。 5. HPLC分析表明叶片中灯盏乙素含量最高，其次是茎和花，而根中含量极低，没有检测到。 6. 以pCAMBIA1390为基础载体，通过酶切、连接构建了PKM24启动子驱动的EbF6H1和EbF6H2基因植物表达载体pCAMBIA1390-PKM24-EbF6H1-bar和pCAMBIA1390-PKM24-EbF6H2-bar，并成功导入根癌农杆菌EHA105。 |
| 并列题名： | Cloning and construction of expression vector of flavone 6-hydroase gene in Erigeron breviscapus eng |
| 题名主题： | 灯盏花 黄酮6-羟化酶(F6H) 基因克隆 载体构建 |
| 中图分类： | Q782-533 |
| 个人名称等同： | 喻孟冬 著 |
| 个人名称次要： | 张广辉 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |