书目详细信息
： 罗伊氏乳杆菌SBC5-3对肠上皮细胞的免疫调节机制研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 罗伊氏乳杆菌SBC5-3对肠上皮细胞的免疫调节机制研究/.胡天念著/.曹振辉指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.7 |
| 载体形态项： | 80页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物科学技术学院, 学号2020210368 |
| 提要文摘： | 益生菌具有调节肠道和机体免疫、维持肠道菌群平衡、预防和治疗腹泻、缓解肠道炎症等生理功能。肠上皮细胞（intestinal epithelial cells, IECs）是益生菌发挥免疫调节作用的重要位点，大量研究证实，益生菌通过与肠上皮细胞相互作用调节肠道免疫，预防肠道炎症疾病，促进机体健康。罗伊氏乳杆菌作为动物肠道常见共生菌，其免疫调节机制有待深入研究。本课题组前期从云南楚雄散养撒坝猪粪便中分离得到一株罗伊氏乳杆菌SBC5-3，并在体外实验中证明该菌具有耐受胃肠道环境、有效黏附肠上皮细胞、抑制主要肠道致病菌增殖和抗生素敏感等益生特性。在前期研究基础上，本研究采用转录组测序（RNA sequencing, RNA-seq）和Western Blotting技术，以转录水平和NF-κB关键炎症信号通路为切入点，深入研究罗伊氏乳杆菌对肠上皮细胞HT-29的免疫调节机制，揭示罗伊氏乳杆菌的抗炎机制。主要研究内容及结果如下： （1）将HT-29细胞以1.5×106个/孔接种于普通6孔细胞培养板，37℃、5%CO2培养箱培养48 h后随机分为Control、TNF-α、SBC5-3+TNF-α和SBC5-3组。提取细胞总RNA进行转录组测序，探究罗伊氏乳杆菌SBC5-3对TNF-α诱导HT-29细胞转录组的影响。差异基因表达分析结果显示：TNF-α_vs_Control组有27个差异表达显著基因，包括24个上调基因和3个下调基因；SBC5-3+TNF-α_vs_TNF-α组共有6961个差异表达显著基因，包括3276个上调基因和3685个下调基因；SBC5-3_vs_Control组共有差异表达显著基因6132个，包括2863个上调基因和3269个下调基因。GO功能注释分析结果表明，TNF-α诱导3 h后，差异基因主要聚集的细胞组分是细胞外空隙，主要参与的生物学过程是信号转导，主要发挥的分子功能是细胞因子活性、受体配体活性和受体调节活性；罗伊氏乳杆菌SBC5-3预孵育16 h、TNF-α诱导3 h后，差异基因主要在细胞内部分聚集，主要参与的生物学过程是生物调节，主要在蛋白结合等分子功能中聚集。KEGG分析结果表明，TNF-α诱导3 h后，有8个基因显著聚集在NF-κB信号通路，且均为上调基因。罗伊氏乳杆菌SBC5-3预孵育16 h、TNF-α诱导3 h后，有36个基因显著聚集在NF-κB信号通路，其中包括18个上调基因和18个下调基因。 （2）根据转录组结果，采用RT-qPCR对免疫相关基因表达量进行验证。将罗伊氏乳杆菌SBC5-3（108 CFU/mL）与HT-29细胞预孵育16 h，然后添加TNF-α（终浓度为50 ng/mL）诱导3 h，提取细胞总RNA，RT-qPCR检测IL-8、IL-1β、CXCL10、CCL20、NFKB1、NFKBIA、TNFAIP3和PTGS2的mRNA表达水平，结果显示：罗伊氏乳杆菌SBC5-3预孵育可显著降低TNF-α诱导HT-29细胞中IL-1β、CXCL10、CCL20、NFKB1和PTGS2的mRNA表达水平（P<0.05），增加NF-κB通路负调控基因NFKBIA的mRNA表达水平（P>0.05）。表明罗伊氏乳杆菌SBC5-3可通过上调NFKBIA的表达抑制TNF-α诱导HT-29细胞中NF-κB信号通路的活化，下调炎症因子IL-8、IL-1β、CXCL10和CCL20的表达，降低细胞炎症反应。 （3）罗伊氏乳杆菌SBC5-3对NF-κB信号通路活化的影响。将罗伊氏乳杆菌SBC5-3（108 CFU/mL）与HT-29细胞预孵育16 h，然后添加TNF-α（终浓度为50 ng/mL）诱导5、15、30和60 min，提取细胞总蛋白，Western Blotting技术检测NF-κB信号通路关键上游激酶TAK1、IκB激酶IKK和抑制蛋白IκBα的磷酸化水平。结果显示：罗伊氏乳杆菌SBC5-3预孵育可降低TNF-α诱导5和15 min时HT-29细胞中p-TAK1和TAK1、p-IKKα/β和IKKα/β以及p-IκBα和IκBα比值（P>0.05），显著降低TNF-α诱导30和60 min时p-IκBα和IκBα比值（P<0.05）。表明罗伊氏乳杆菌SBC5-3可通过抑制NF-κB信号通路上游激酶TAK1和IκB激酶IKK的磷酸化、抑制蛋白IκBα的降解，从而抑制TNF-α诱导人肠上皮细胞HT-29中NF-κB信号通路的活化。 综上所述，罗伊氏乳杆菌SBC5-3可下调TNF-α诱导的与炎症相关的细胞因子、趋化因子及其受体以及参与肠上皮细胞NF-κB等先天免疫信号通路基因的表达，上调NF-κB抑制因子NFKBIA的基因表达，抑制NF-κB信号通路上游激酶TAK1和IκB激酶的磷酸化水平，抑制抑制蛋白IκBα降解，阻断NF-κB信号通路活化，进而减轻TNF-α诱导的肠细胞炎症反应。研究结果为深入阐明罗伊氏乳杆菌肠上皮水平免疫调节机制提供了理论依据。 |
| 并列题名： | Study on Immunomodulatory Mechanism of Lactobacillus Reuteri SBC5-3 on Intestinal Epithelial Cells eng |
| 题名主题： | 乳酸菌 罗伊氏乳杆菌 肠上皮细胞 免疫调节 NF-κB信号通路 学位论文 |
| 中图分类： | S852.4-533 |
| 个人名称等同： | 胡天念 著 |
| 个人名称次要： | 曹振辉 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240517 |