书目详细信息
： 敲除生长激素受体致巴马猪生长迟缓的机制研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 敲除生长激素受体致巴马猪生长迟缓的机制研究/.杨明沙著/.刘永刚指导 |
| 出版发行项： | 2023.5.25 |
| 载体形态项： | 72页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 动物科学技术学院, 学号202021035 |
| 提要文摘： | 生长激素受体（ GHR ） 是 I 类细胞因子受体家族的成员，在家畜上最主要的功能是调节生长，包括家畜骨骼长度和密度、仔猪生长时期的肌肉质量等，但还具有其他生物学功能，包括调节整个过程中的脂质和碳水化合物新陈代谢，控制生理过程等。CRISPR/Cas9是近些年出现由sgRNA介导的，利用Cas9蛋白对靶向基因进行编辑的技术，BE也是近几年出现的无需供体模板，且能够以可编程的方式实现精确的单核苷酸替换的编辑方式，近年来，这两项技术迅速发展并且在家畜遗传与育种领域得到广泛应用。相关研究表明，GHR基因敲除猪不仅是良好的拉伦病的病理生理学模型，且也是异种器官实验和移植的良好供体。本研究利用CRISPR/Cas9和CBE基因编辑技术，构建GHR基因敲除载体及细胞系并对其进行敲除效果评估，实验结果如下： 1. 成功构建GHR敲除CRISPR/Cas9单克隆细胞系以及CBE细胞药筛混池 本文成功构建了针对GHR基因exon1、4的CRISPR/Cas9载体pX330-Puro_T2A_GFP，以及针对exon1、2、6的CBE载体PX-YE1-BE4maxNG，并且通过质粒连接、转化、提取、转染、药筛以及单克隆挑选得到了GHR敲除CRISPR/Cas9 单克隆细胞并构建了细胞系用于体细胞克隆，还得到了CBE载体GHR基因敲除的细胞混池并对两种方式进行t7酶切证明CRISPR/Cas9编辑效率更高； 2. 成功对CRISPR/Cas9敲除GHR基因细胞进行机制验证 本文成功对CRISPR/Cas9敲除GHR细胞系做了以下几个方面的验证：通过Western Blot验证了GHR基因敲除之后在蛋白表达方面上，PEF细胞完全不发生GHR基因的表达，而PK15细胞有极少量的表达，二者细胞在其他增殖基因（CDK4、Cyclin D1、Cyclin E1、PCNA）上也有显著的抑制效果；通过CCK8检测验证了GHR基因敲除后两种细胞的增殖都受到极显著的抑制；通过细胞周期的检测验证了GHR基因敲除后细胞主要增殖时期S期受到了极显著的抑制。 3. 成功构建GHR干扰shRNA载体pLKO.1-EGFP-PURO并进行了qPCR验证 本文成功根据GHR基因的CDS区域设计了GHR干扰shRNA序列并把它连接在载体pLKO.1-EGFP-PURO上，提取质粒转染48h后，收取细胞进行RNA的提取，再进行RNA的反转录为cDNA，设计qPCR引物合成后，对cDNA进行qPCR检测，验证了在mRNA水平上，GHR基因干扰后在目的基因GHR和其他的增殖基因（CDK4、Cyclin D1、Cyclin E1、PCNA、ki67）也有极显著的抑制效果。 本研究成功用两种不同的编辑方式敲除GHR基因，并用CRISPR/Cas9构建出了GHR基因敲除单克隆细胞系，并对GHR基因敲除后的机制进行了研究，发现GHR基因敲除后，细胞蛋白不表达，细胞增殖受到极显著的抑制，对研究巴马猪生长发育具有重要参考价值和借鉴作用。 |
| 并列题名： | Study on the mechanism of growth retardation induced by knockout of growth hormone receptor in Bama pigs eng |
| 题名主题： | CRISPR/Cas9 Base Editor 生长激素受体 生长迟缓机制 学位论文 |
| 中图分类： | Q341-533 |
| 个人名称等同： | 杨明沙 著 |
| 个人名称次要： | 刘永刚 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240509 |