书目详细信息
： TVDV的CP、RTP对TBTV的异源包裹及其在蚜虫传播中的作用研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY40.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | TVDV的CP、RTP对TBTV的异源包裹及其在蚜虫传播中的作用研究/.罗恒明著/.李凡, 陈小娇指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.29 |
| 载体形态项： | 141页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 植物保护学院, 学号2019110045 |
| 提要文摘： | 烟草丛顶病（tobacco bushy top disease, TBTD）主要是由烟草扭脉病毒（Tobacco vein distorting virus, TVDV，马铃薯卷叶病毒属成员）、烟草丛顶病毒（Tobacco bushy top virus, TBTV，幽影病毒属成员）、烟草扭脉病毒伴随RNA（Tobacco vein distorting virus-associated RNA, TVDVaRNA）和烟草丛顶病毒卫星RNA（Tobacco bushy top virus satellite RNA, TBTVsatRNA）4种病原物协生引起的植物病害，给烟草生产造成毁灭性灾害，该病害主要通过介体蚜虫传播。TVDV是TBTD 4种病原物中唯一能编码结构蛋白的病毒，TVDV的结构蛋白包括外壳蛋白（CP）和通读蛋白（RTP），结构蛋白在植物病毒的蚜虫传播过程中是必不可少的。TBTV不编码结构蛋白，单独不能经蚜虫传播，在TVDV的协助下TBTV可经蚜虫传播。有研究表明，马铃薯卷叶病毒属成员在协助幽影病毒进行蚜虫传播的过程中，主要通过马铃薯卷叶病毒属成员的结构蛋白对幽影病毒基因组RNA的异源包裹作用完成。然而，TVDV协助TBTV蚜虫传播的机制仍不甚清楚，TVDV编码的结构蛋白CP和RTP以及TBTV编码的蛋白是否参与TVDV对TBTV RNA的异源包裹作用来协助TBTV进行蚜虫传播的过程及其相互作用也有待探究。本研究以TVDV和TBTV为主要研究对象，通过病毒粒体的纯化及其主要组分分析，并结合蚜虫传毒实验，探究了TVDV结构蛋白对TBTV异源包裹中的作用，同时通过构建不表达P3蛋白的TBTV突变体，分析TBTV P3蛋白在TVDV协助TBTV蚜虫传播过程中的作用以及在TBTV对烟草致病性中的影响，主要研究结果如下： 1. 蚜虫传毒实验结果表明，TVDV单独即可被烟蚜传播，传播效率在33% ~ 66%；而TBTV单独则不能被烟蚜传播，但在TVDV协助下烟蚜可以传播TBTV，传播效率在16% ~ 66%。TVDV侵染的本氏烟植株中能提纯到由TVDV CP、RTP和TVDV RNA组成的球状病毒粒子，直径约30 nm，烟蚜膜饲喂提纯的TVDV病毒粒子后，烟蚜能传播TVDV。TVDV和TBTV复合侵染的本氏烟植株中可纯化得到由TVDV CP、RTP包裹TVDV RNA或TBTV RNA形成的两种球状病毒粒体，一种直径约30 nm，另一种直径约25 nm，烟蚜膜饲喂提纯的病毒粒体后，烟蚜可传出TVDV和TBTV。以上结果表明TVDV结构蛋白可异源包裹TBTV，并协助TBTV进行蚜虫传播。 2. 利用病毒载体pGR107将TVDV的cp和rtp基因在本氏烟中进行瞬时表达，瞬时表达TVDV CP和TBTV共侵染的本氏烟植株中能提纯得到2种球状的类病毒粒体，一种直径约30 nm，另一种直径约25 nm，提纯的病毒粒体中能检测到大量的TVDV CP蛋白，还能扩增得到TBTV全长基因组；提纯的这些类病毒粒体注射接种本氏烟植株14天后，在接种植株系统叶中也能检测到TBTV，但烟蚜膜饲喂这些类病毒粒体后不能传出TBTV。同样的，从接种了TBTV并同时表达了TVDV RTP的本氏烟植株中也可纯化得到球状类病毒粒体，直径约20 ~ 22 nm，病毒粒体中也能检测到TBTV全长基因组，但未检测到TVDV CP蛋白，烟蚜膜饲喂这些类病毒粒体后不能传出TBTV。烟蚜直接取食表达TVDV CP蛋白与TBTV共同侵染的本氏烟植株后，烟蚜不能传出TBTV，但取食同时表达TVDV CP和RTP蛋白并与TBTV共同侵染的本氏烟植株后，烟蚜可以传播TBTV；同时，烟蚜取食仅表达TVDV RTP蛋白和TBTV侵染的本氏烟植株或烟蚜膜饲喂表达TVDV RTP蛋白和TBTV侵染的本氏烟叶片汁液后，烟蚜也能传播TBTV。这些结果表明，TVDV结构蛋白CP和RTP均能包裹TBTV RNA形成类病毒粒体，TVDV RTP蛋白是协助TBTV进行蚜虫传播的关键蛋白。 3. 融合荧光蛋白的亚细胞定位实验表明，单独表达TVDV CP定位于细胞核和细胞膜；与单独表达TVDV CP相比，表达TVDV CP和TBTV接种36 h的本氏烟叶表皮细胞中TVDV CP在细胞膜上的荧光强度增加；单独表达TBTV编码的P3或P4蛋白定位于细胞核和细胞膜。共定位实验显示，TBTV P3和P4均能与TVDV CP共定位于细胞核。双分子荧光互补筛选实验显示，TBTV P3蛋白均能与TVDV编码的CP、P17、RTD发生互作。其中，TBTV P3和TVDV CP互作场所位于细胞质，TBTV P3与TVDV CP发生互作的关键结构域位于P3蛋白N端第1-158位氨基酸；TBTV P3与TVDV P17、RTD互作的亚细胞场所定位于细胞核和细胞膜，TBTV P3与TVDV P17互作的关键结构域位于P3蛋白N端第1-158位氨基酸或C端第169-229位氨基酸；TBTV P3和TVDV RTD互作的关键结构域位于P3蛋白C端第159-168位氨基酸。这些结果显示，TBTV P3能与TVDV结构蛋白等发生互作，暗示P3可能在TVDV结构蛋白协助TBTV进行蚜虫传播过程中具有重要作用。 4. 利用不表达P3蛋白的TBTV突变体（TBTV△P3）进行的研究表明，TBTV△P3在普通烟K326或本氏烟植株中均能进行系统侵染，但不产生任何症状，也未检测到TBTV P3蛋白的表达，同时TBTV△P3与TVDV、TVDVaRNA和TBTVsatRNA共接种的普通烟K326植株也无任何明显的症状，而野生型的TBTV单独或与TVDV、TVDVaRNA和TBTVsatRNA复合侵染的普通烟K326植株系统叶出现坏死、褪绿等症状。另外，不表达TBTV P3蛋白后，TVDV协助TBTV突变体（TBTV△P3）烟蚜传播的效率极显著降低，蚜虫传播TBTV△P3的效率为0 ~ 16%。在TVDV和TBTV△P3共侵染的本氏烟植株中能纯化得到2种球状的病毒粒体，一种直径约30 nm，另一种直径约25 nm，这些病毒粒体中能检测到TVDV CP蛋白和TBTV△P3全长基因组，烟蚜膜饲喂这些病毒粒体后也能传出TBTV△P3。这些结果显示，TBTV P3是一个关键致病蛋白，虽然在TVDV协助TBTV蚜虫传播的过程中不是起到决定性的作用，但P3蛋白对于提高TVDV协助TBTV蚜虫传播的效率具有重要作用。 本研究探明了TVDV的CP和RTP是异源包裹TBTV RNA形成类病毒粒体和协助TBTV进行蚜虫传播的主要蛋白。TBTV P3在提高TVDV协助TBTV蚜虫传播的效率中具有重要作用，同时TBTV P3是一个重要的致病蛋白，在TBTV单独和TBTD主要4种病原物协同侵染普通烟K326植株引起系统叶出现症状的过程中发挥着关键作用。相关研究结果为阻断TBTD的蚜虫传播和TBTD病害的致病成灾机理研究提供了重要的理论依据。 |
| 并列题名： | Studies on the roles of CP and RTP encoded by TVDV for heterologous encapsidation of TBTV and transmission by aphid eng |
| 题名主题： | 病毒的协生 烟草扭脉病毒 烟草丛顶病毒 异源包裹 蚜虫传播 学位论文 |
| 中图分类： | S432.1-533 |
| 个人名称等同： | 罗恒明 著 |
| 个人名称次要： | 李凡 指导 |
| 个人名称次要： | 陈小娇 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |