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： 辣木叶抗氧化肽的制备及对HepG2细胞氧化损伤作用研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 辣木叶抗氧化肽的制备及对HepG2细胞氧化损伤作用研究/.刘艳著/.肖蓉, 赵一鹤指导 |
| 出版发行项： | 2021.6.4 |
| 载体形态项： | 63页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 食品科学技术学院, 学号2019240062 |
| 提要文摘： | 辣木叶是新资源食品原料，具有“高蛋白、高钙、高纤维、低脂质”的特点，营养价值较高。且氨基酸组成比例适当，能满足人体对蛋白的营养需求。活性肽与蛋白质相比，更容易消化吸收，并具有较好的稳定性、溶解性及抗氧化性。本文以辣木叶粉为原料提取辣木蛋白，并通过酶解技术制备具有抗氧化活性的多肽，利用超滤技术分离，测定不同肽段抗氧化活性，筛选抗氧化活性较高的目标肽段，并采用质谱技术对目标肽段进行序列鉴定，探究其体外抗氧化活性，并对其构效关系进行研究。具体研究结果如下。 1. 辣木叶蛋白提取工艺及物理特性的研究。采用碱溶硫酸铵沉淀法提取蛋白，在温度、pH、料液比、提取时间等因素的基础上，最佳提取条件为：温度55 °C，pH 值9，液料比1:40，提取时间60 min，此条件下蛋白的提取率最高，可达68.34%，且有较好的乳化性、乳化稳定性、持水性及吸油性。所得的辣木叶蛋白在pH值4.0左右有最佳的沉降效果，在pH值为10.0时，乳化力及乳化稳定性最高，分别为19.15 m2/g、144.87%；温度在50 °C时，持水性和吸油性分别为1.23 g/g、1.45 g/g。 2. 辣木叶抗氧化肽的制备工艺研究。以DPPH自由基清除率和多肽含量为考察指标，选用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶在最适宜条件下对辣叶蛋白酶解，筛选出碱性蛋白酶为最适水解酶。采用Box-Behnken Design设计实验确定最佳酶解条件为酶解时间5 h，加酶量3000 U/g，酶解温度50 °C，制备得多肽含量可达23.3 mg/g，酶解产物的DPPH自由基清除率为73.64%。 3. 辣木叶抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定。以抗氧活性为评价指标，采用超滤对多肽按分子量大小分段，其不同分子量的氧化能力顺序为1 K Da＞3 K Da＞5 K Da＞10 K Da，即分子量越小抗氧化效果越好。通过Tricine-SDS-PAGE对小分子肽分离纯化，对活性肽段进行LC - MS/MS鉴定分析，得到21个氨基酸序列，多肽分子量在722.4329 Da ~ 1791.7952 Da之间，肽段氨基酸含量丰富，富含亮氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸等具有抗氧化活性的氨基酸，其中肽段LALPVYN、GHVALVFVN、FHEEDDAKLF、LDEGKWQHVK、LHIAALVFQ的肽链的中C端或N端都存在疏水性氨基酸且均含有芳香环、咪唑基团、含硫基团，对肽段的抗氧化活性有一定的增强效果。 4. 辣木叶抗氧化肽对HepG2细胞氧化损伤保护效应。培养HepG-2细胞，建立氧化损伤模型，探究辣木叶抗氧化肽的细胞毒性及细胞氧化损伤保护效应。研究明确了诱导HepG2细胞氧化损伤的最佳条件为：在500 μM H2O2条件下作用4 h，模型存活率为64.03%。用不同浓度辣木叶抗氧化肽（50、100、200 μg/mL）处理细胞24 h后，检测细胞存活率、细胞内GSH、CAT、MDA、SOD含量、流式技术检测细胞凋亡率。用药物处理后的组分细胞存活率提高至80.12 ~ 85.11%，损伤组细胞内GSH含量33.06 U/mg pro、CAT含量7.39 U/mg pro、MDA含量11.16 U/mg pro、ROS含量为103.4%，与损失组相比，药物组（50、100、200 μg/mL能显著提高细胞内GSH（42.72、50.93、58.72 U/mg Pro）和CAT（13.15、17.15、17.50 U/mg pro）活性。药物组也能够有效的降低细胞内的MDA含量（3.49、5.54、6.97 nmol/mg pro），也能减少由H2O2引起的细胞内ROS（71.45%、62.91%、57.91%）水平的升高。与正常相比较，H2O2会使细胞形态改变，损伤组细胞凋亡率为17.1%，经过辣木叶抗氧化肽处理后细胞凋亡率降低降到12.93%、4.76%、4.23%。 综上所述，研究得到的辣木叶抗氧化肽多为小于1000 Da的小分肽，且抗氧化能力较强，经氨基酸序列对比，发现抗氧化肽组成中多富含亮氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸等具有抗氧化活性的氨基酸残基；基于HepG2细胞氧化损伤模型，表明了辣木叶抗氧化肽对于细胞氧化损伤具有一定的保护效应，可为抗氧化食品及护肤品的开发提供一定的理论基础。 |
| 并列题名： | Preparation of Moringa Antioxidant Peptide and Study on Its Oxidative Damage to HepG2 Cells |
| 题名主题： | 辣木叶蛋白 抗氧化肽 分离鉴定 抗氧化活性 细胞凋亡 学位论文 |
| 中图分类： | TS201.2-533 |
| 个人名称等同： | 刘艳 著 |
| 个人名称次要： | 肖蓉 指导 |
| 个人名称次要： | 赵一鹤 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20220620 |