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： 核桃分心木多酚的分离纯化及降脂活性研究
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 核桃分心木多酚的分离纯化及降脂活性研究/.白玉英著/.李世俊指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.16 |
| 载体形态项： | 67页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 食品科学技术学院, 学号2020210089 |
| 提要文摘： | 随着生活水平的提高，肥胖已成为危害人类健康的重要问题，引发多种疾病。从天然植物中寻找安全、有效的成分进行肥胖防治，已成为重要的研究方向，多酚在天然植物中广泛存在，研究发现多酚具有多种生物学活性，因其良好的疗效和安全性，目前已成为国内外肥胖防治领域的研究热点。本论文以大理漾濞食药共用的核桃分心木（Walnut diaphragm）为研究对象，采用超声辅助纤维素酶法提取其中的多酚类成分，通过大孔吸附树脂法对分心木多酚粗提物进行纯化，然后对纯化物进行抗氧化和降脂活性的评价，同时运用亲和超滤与分子对接技术，以胰脂肪酶为靶点，从核桃分心木多酚化合物中筛选及鉴定胰脂肪酶抑制剂。为合理开发和利用核桃分心木资源提供理论支持和科学参考。 具体研究结论如下： (1) 探究超声辅助纤维素酶法提取核桃分心木多酚的最佳工艺条件 在单因素实验的前提下，选取酶添加量、液料比、超声功率、超声时间为变量，多酚提取率（Y）为响应值，通过四因素三水平的响应面实验对超声辅助纤维素酶法提取核桃分心木多酚的提取工艺参数进行优化。最终优化后的提取工艺条件为： 酶添加量0.60%、液料比80:1 (mL/g)、超声功率600 W、超声时间60 min、乙醇浓度60%和超声温度45℃，在此条件下进行验证实验，多酚提取率为7.26%。 (2) 大孔树脂的筛选与最佳纯化条件的确定 挑选3种不同型号（AB-8、D101、HP-20）的树脂，筛选出对核桃分心木多酚纯化效果最优的树脂，对其进行静态吸附解吸实验，结果表明D101型号大孔树脂的吸附量为13.09 mg/g、吸附率为85.09%、解吸率为82.94 %，在三种树脂中吸附解吸能力最好。 实验得到D101大孔树脂纯化核桃分心木多酚的最佳条件为：吸附平衡与解吸平衡时间4h、上样液质量浓度2.0 mg/mL、上样液的PH值5.0、洗脱剂是体积浓度为30%的乙醇、洗脱剂体积为层析柱体积的5倍、洗脱流速为2.0~3.0 mL/min，此条件下，核桃分心木多酚纯度由26.47%升高到87.36%，经冻干后得到亮棕色的粉末为核桃分心木多酚精提物（WDPs）。 (3) 核桃分心木多酚体外抗氧化性的评价 对WDPs进行DPPH·自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力和铁离子还原能力（FRAP）的测定，用维生素C (Vc) 为阳性对照。WDPs对DPPH·自由基和、ABTS+自由基清除力的 IC50值分别为11.11 μg/mL和183.12 μg/mL，铁离子还原能力是达到同等质量浓度Vc的59.62%，结果表明WDPs在三种抗氧化体系中都有较好清除作用。 (4) 核桃分心木多酚体外降脂活性的评价 以胰脂肪酶为研究对象，研究 WDPs 对消化酶活性的抑制作用，结果表明WDPs对胰脂肪酶具有抑制效果，其 IC50 值为 155.9 μg/mL。以3T3-L1细胞为模型，研究WDPs的体外抗肥胖作用，结果表明WDPs 的浓度在 200 μg/mL 以内，对 3T3-L1 细胞不具有毒性。在此浓度范围内，细胞内脂质含量随处理剂量的增加而显著降低，此外WDPs（50、100和200 μg/mL）处理可以以剂量依赖的方式降低3T3-L1脂肪细胞的TC、TG和LDL-C水平（P＜0.01），同时显著提高HDL-C水平，结果表明WDPs改善成熟脂肪细胞中的脂质代谢紊乱问题，证明了WDPs对肥胖引起的脂代谢紊乱具有改善作用。 (5) 核桃分心木多酚降脂活性单体的筛选及鉴定 选取与降脂直接相关的作用靶点胰脂肪酶，建立亲和超滤结合高效液相色谱和三重四极杆飞行时间质谱（AUF-HPLC-Q-TOF/MS）的分析方法用于快速筛选和表征WDPs中的胰脂肪酶配体。实验设置空白组和灭活组以排除实验方法的非特异性干扰。通过该方法共推断了10个化学成分，根据计算特异性结合值（RBA），将RBA值大于 1.5的7个化合物作为胰脂肪酶的特异性配体。其中中1,2,3,6－四-O－没食子酰－β-D－葡萄糖的特异性结合最强（5.29），其次是咖啡酸（2.98），5-O－咖啡酰莽草酸（2.79），1,3,6－三-O－没食子酰－β-D－葡萄糖（1.92），隐绿原酸（1.84），芥子醛（1.61）和1,2,6－三-O－没食子酰－β-D－葡萄糖（1.59）。 通过AutoDock Vina1.1.2软件对7个特异性配体进行分子对接评价来确定具有较好活性的脂肪酶抑制剂，并通过结合力和结合模式了解可能的作用机理。结果显示1,2,3,6－四-O－没食子酰－β-D－葡萄糖、1,3,6－三-O－没食子酰－β-D－葡萄糖和1,2,6－三-O－没食子酰－β-D－葡萄糖的分子对接结合能最低为-7.5 kcal/mol，7个特异性配体的结合能力均比阳性药物奥利司他强，说明它们对胰脂肪酶具有较好的抑制作用，主要通过与活性氨基酸形成氢键与疏水相互作用和胰脂肪酶靶蛋白进行结合。 本论文研究了核桃分心木多酚的提取、纯化、体外降脂活性以及降脂活性单体的筛选鉴定，为核桃分心木多酚进一步开发成为降脂功能食品提供了理论基础，也为分心木资源的综合利用提供新思路。 |
| 并列题名： | Isolation and purification of walnut diaphragm polyphenols and study on hypolipidemic activity |
| 题名主题： | 核桃分心木 多酚 3T3-L1脂肪细胞 降脂 亲和超滤 分子对接 学位论文 |
| 中图分类： | R284.2-533 |
| 个人名称等同： | 白玉英 著 |
| 个人名称次要： | 李世俊 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |