书目详细信息
： 藜麦花发育相关基因CqAGL11的克隆及功能分析
书目信息 机读格式(MARC)
| ISBN/价格： | CNY20.00 (估\呈缴)学位论文 |
|---|---|
| 作品语种： | chi |
| 出版国别： | CN 530000 |
| 题名责任者项： | 藜麦花发育相关基因CqAGL11的克隆及功能分析/.袁程著/.林春指导 |
| 出版发行项： | 2023.6.19 |
| 载体形态项： | 71页:;+图表:;+30cm |
| 一般附注： | 农学与生物技术学院, 学号2020210132 |
| 提要文摘： | 藜麦原产于南美安第斯山，其籽粒是全营养食品，秸秆和全株是优质饲草。当前藜麦花发育调控机制不明，通过对日中性的W19和短日的W25两个光周期的藜麦进行MADS-Box家族鉴定和转录组测序分析，筛选获得发育相调控雌花发育相关的 AGL11（AGAMOUS like 11）基因。为探索出藜麦CqAGL11基因在藜麦发育调控中的功能，克隆了CqAGL11基因，通过qRT-PCR、亚细胞定位、拟南芥过表达及VIGS（Virus-induced gene silencing）行了初步的功能分析，结果如下： （1）通过RT-PCR克隆CqAGL11基因，开放阅读框为672 bp，编码224个氨基酸。对CqAGL11编码的蛋白进行生物信息学分析发现其不存在跨膜结构域，说明CqAGL11蛋白不属于跨膜蛋白。对CqAGL11基因上游2000 bp启动子区域顺式作用元件预测，发现155个顺式作用元件，除核心启动子元件外含有参与光反应的保守DNA模块，光响应元件，说明CqAGL11可能受光信号的调控。CqAGL11蛋白与拟南芥AtAGL11蛋白三级结构预测，结果显示，两个蛋白均有两个保守结构域，MADS_MEF2_like和K-box保守结构域，属于MADS-Box家族基因。 （2）采用qRT-PCR的方法分析CqAGL11基因在藜麦品系W19和W25组织特异性的表达模式。发现CqAGL11在这两个不同光周期材料的根、茎、叶片及花序中均有表达，根、茎、叶片中的表达量均极显著低于开花期花序的表达量，随着植株的抽穗、开花到灌浆期，CqAGL11基因的表达量不断增加，灌浆期花序中的表达为最高。 （3）构建了表达载体PBI121- CqAGL11-eGFP，并将重组载体PBI121-CqAGL11-eGFP注射到本氏烟叶（Nicotiana benthamiana）中，以pBI121-eGFP空质粒为对照。结果表明，pBI121-eGFP的绿色荧光信号在烟草叶片的表皮细胞细胞核和胞质中均有分布，而重组质粒35S::CqAGL11::GFP的绿色荧光信号则分布在细胞核中和细胞膜，说明藜麦CqAGL11基因表达的蛋白产物定位于细胞核和细胞膜。 （4）CqAGL11可在大肠杆菌中表达，原核表达分析表明，CqAGL11蛋白最佳诱导表达条件为0.01 mmol/L IPTG，诱导时间和温度分别为4 h和28℃。蛋白可溶性分析结果表明，CqAGL11可能以包涵体的形式存在。 （5）对CqAGL11基因序列进行Blat分析，选取了一个保守片段（CqAGL11 Conservative Fragment，AC）和一个特异片段（CqAGL11 Specific fragment，AS）分别构建到烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus, TRV）载体上。重组载体与TRV1菌液按体积1:1混合，注射到藜麦叶片背部。培养21 d，检测到该病毒载体转入藜麦植株中，实验组的CqAGL11基因表达量显著低于对照组，但在表型上未能观测到明显的表型差异。 （6）构建CqAGL11基因的超表达载体转化拟南芥野生型和atagl11突变体，对侵染后的T2代过表达阳性植株和回补转基因拟南芥进行组织切片看内部结构，和果荚长度与每粒种子数统计，结果为：突变体和回补后的拟南芥果荚短于野生型和过表达。atagl11突变体和回补的拟南芥花柱短，野生型和过表达拟南芥花柱长。atagl11突变体果荚和回补的果荚长度短于野生型和过表达拟南芥果荚；atagl11突变体种子会呈现干瘪状，野生型、过表达和回补的拟南芥种子饱满。atagl11突变体果荚长度极显著短于野生型，对突变体回补后果荚长度与突变体果荚长度差异不显著。atagl11突变体种子数极显著低于野生型，回补后种子粒数显著高于突变体，过表达种子粒数显著高于野生型。 从以上结果推测，CqAGL11基因可能在植物胚的发育中具有重要作用。 |
| 并列题名： | Cloning and functional analysis of CqAGL11 Gene Related to Flower Development in Chenopodium quinoa |
| 题名主题： | 藜麦 CqAGL11基因 基因克隆 表达分析 亚细胞定位 学位论文 |
| 中图分类： | Q75-533 |
| 个人名称等同： | 袁程 著 |
| 个人名称次要： | 林春 指导 |
| 团体名称等同： | 云南农业大学 授予 |
| 记录来源： | CN YNAUL 20240301 |